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    蛋白質免疫印跡實驗（WB）的常見問題分析
    來源：測試GO 時間：2022-09-07 14:16:01 瀏覽：4395次

    1、蛋白質免疫印跡實驗中蛋白樣本為什么要進行還原和變性？

    答：為了使樣本被還原和變性，樣品緩沖液中會含有十二烷基硫酸鈉(SDS)和β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)。SDS是一種變性劑，用來打破蛋白的高級結構，變成初級的氨基酸結構，同時以恒定的質量比包被蛋白質，使其帶上負電荷。這一恒定的負電荷比是下一步凝膠電泳分離的關鍵。β-巰基乙醇和DTT都是還原劑，用來斷開蛋白自身的二硫鍵，進一步使蛋白質變成線性結構，此圖中簡單地展示了這一過程。順便提一下，有些抗體只能夠識別目標蛋白的天然結構，在這種情況下，樣本不需要被還原和變性。所以還原和變性的步驟可以省略。但是，大多數蛋白質印跡分析都需要在還原和變性的體系中進行。

     蛋白質免疫印跡實驗圖片

    2、為什么檢測重組蛋白時難以獲得條帶？

    答：抗體檢測重組蛋白質時，存在難以克服的困難，有必要加以考慮。所以推薦確保樣品中表達的重組蛋白包含所用抗體的免疫原序列。同時，如果重組蛋白帶有標簽，標簽可能阻止抗體接近表位。盡可能讓標簽位于重組蛋白的C或N末端，以降低這種情況發生的可能性（而不是位于蛋白質的閱讀框中間）。

    3、牛奶和 BSA 封閉有區別？

    答:抗體可能對封閉劑敏感，一般來講，BSA會產生更清晰的結果，因為BSA含有較少的蛋白，因而抗體較少與其發生交叉反應。但并非總是如此，有些抗體在牛奶中的效果更好，因為牛奶含有更多種類的封閉蛋白，能封閉更多不同類型的蛋白質。


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    評論 / 文明上網理性發言
    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具?，F代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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