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    當(dāng)前位置：生物測試 ?  細(xì)胞實(shí)驗(yàn) ? 

    細(xì)胞毒性/增殖

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    細(xì)胞毒性/增殖

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    項(xiàng)目介紹

    細(xì)胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種，檢測藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過檢測材料或者藥物對細(xì)胞的增殖或者生長的影響，來評價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測。

    操作流程：

    （1）收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3x104  ~5x104 個(gè)/mL；

    （2）96孔加入細(xì)胞懸液，100ul/孔，邊緣用pbs填充，5%CO2 、37℃孵育；

    （3）培養(yǎng)24h后給藥，設(shè)置3~6個(gè)復(fù)孔，5%CO2 、37℃孵育；

    （4）孵育適當(dāng)時(shí)間后，棄舊液，用無血清培養(yǎng)基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無血清培養(yǎng)基與MTT按照9:1稀釋，200ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)至所需時(shí)間點(diǎn)；

    （5）CCK8: 時(shí)間到后，酶標(biāo)儀450nm/處測量各孔的吸光值。

    客戶提供：

    （1）足量樣品、樣品信息（如細(xì)胞類型、分子量、溶解性、穩(wěn)定性、保存條件等）；
    （2）相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容（如樣品作用時(shí)間、濃度等、細(xì)胞株等）。

    樣品要求

    1.待測樣品（濃度用戶指定）、實(shí)驗(yàn)方案、相關(guān)細(xì)胞、試劑盒及生物耗材等，平臺可有償提供。

    項(xiàng)目案例

    常見問題
    1、MTT法檢測細(xì)胞活性原理

    在活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臢化合物，用二甲基亞砜（DMSO）將其溶解成溶液，用酶標(biāo)儀測定其濃度（OD490或者570)，從而定量測定細(xì)胞的存活比例，細(xì)胞增殖越多越快，對應(yīng)的吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，對應(yīng)的吸光度越低。

    2、CCK8法檢測細(xì)胞活性原理

    CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗(yàn)明正身。在脫氫酶作用下，WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

    3、相較于MTT法，CCK8試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？

    1.使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；

    2.CCK-8法能快速檢測；

    3.CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度；

    4.CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT 法；

    5. CCK8適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞；如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO，建議選用CCK8法檢測。

    細(xì)胞毒性/增殖

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